实训六 外植体叶片接种培养
(一) 实训目的
熟练掌握叶片培养环节中，外植体灭菌、接种、培养观察与对策以及驯化技术。
(二) 实训材料
矮牵牛或菊花等。
(三) 实训场地
组培实验室。
(四) 实训内容
1. 培养基制作
2. 外植体选取，灭菌和接种
3. 培养观察与对策
(五)实训安排
1．配制培养基时每四人一组，每组做一升培养基。即每人平均10瓶培养基。
2．采取材料和接种时按每6人为一组。
（六）实训步骤
1.外植体选取灭菌和接种
(1)选取植物顶芽，5枚以下软幼嫩且成熟的叶片，无病、无虫，健康。先清
洗干净，用常规灭菌法灭菌，放于无菌滤纸上吸干，以供接种选用。
(2)事先配置好诱导培养基，配方为MS+BA1。
(3)取叶片近中脉处，切成0.5厘米见方小块，放置到培养基表面上。每瓶可
接1－3枚叶块。
2.培养观察与对策
(1)接种后10天内，每天定期及时剔除污染，记录生长状态，约1周后发现叶
片边缘隆起，增 肿大，呈凸凹不平状态，视为愈伤组织分化态。
(2)转移到增殖培养基中，配方为MS+BA0.5过几天后，可见愈伤组织表面分化
出小芽点进而长成不定芽；有时也可以直接从叶块外植体上生出不定芽。
(4)当出现不定芽后，可继续用分化培养茎进行扩繁，每组扩繁苗数50株以上。
(五) 实训思考和作业
1. 叶片灭菌要注意什么？易出现什么问题？
2. 愈伤组织生成时，叶块发生什么变化？
3. 写出叶片培养的实训报告。
实训七　生根培养
(一) 实训目的
熟练掌握生根培养的各个技术环节，包括生根试管的接种，培养观察与对策等。
(二)实训时间 时间不限。
(三)实训材料 菊花等试管苗
(四)实训场所 组培实验室
(五)实训内容
1.　生根培养基的制作
2．生根试管苗的接种和培养。
2.　培养观察。
（六）实训过程
生根培养基基配制时可配制1/2MS，另加NAA1－2，不要加入细胞分裂素类生
长调节物质。
打开种苗瓶，对瓶口先外壁，后内壁过火。然后准备接种：先将种苗移到培
养皿里。对香石竹等茎梢可切割茎段，剪时要茎节上部少留，节下部多留。
每瓶可接4—5个茎段或小芽，接好后，瓶口和封口膜均要过火，扎口。每接完
一瓶，接种工具要放回酒精消毒瓶。
培养时，注意观察生根情况，约20天后开始分化生根，以出现长度在1cm、洁
白均匀整齐的不定根为佳。不要使根发生徒长现象。
（七）思考和作业
1．生根培养基和其它培养基有什么区别？
2．生出的不定根以什么标准较好？