四.MS培养基的合成
用量筒取大量元素母液100ml倒入1000ml定容瓶中；用专用的移液管
分别移取微量元素母液10ml ，铁盐母液10ml ，有机物母液10ml ，均加
入该定容瓶中。再用蒸馏水定容至刻度，摇匀。取3/1至1/2液体培养基移
入电饭锅中，
称取琼脂丝7－9g和蔗糖25g放入锅中，通电加热，烧开后改用文火，
至琼脂全部融化，透澈见底为止。
从电饭锅上取下冷却后，用0.1N的NaOH或0.1N HCl调整pH值为5.8。
也可用经验法直接加入酸或碱液调整 pH值。
五.培养基的分装
搅拌均匀后，分装到三角瓶中，每瓶约25-30 ml，即1升培养基分装40-35
瓶，最后用封口塑料膜包上瓶口，用线绳扎口，写上标号。
六.培养基灭菌
按灭菌器使用方法对培养基灭菌，高压保持20分钟。灭完后取出培养基
中放在平台上冷凝。
实训三 试管苗的茎段转接（继代培养）

一、目的要求：熟练掌握培养基的制作过程，掌握试管苗的茎段转接过程。
一、仪器及试剂：超净工作台及配套接种用具(无菌接种工具、酒精灯、酒精
棉球、70%酒精瓶，无菌培养皿、打火机等)
二、 试验材料： 取矮牵牛等试管苗。选择长势好，高度达5cm以上的
茎梢种苗或芽丛种苗。每个超净台配给2瓶种苗。
三、 空白培养基： 准备事先做好的10瓶空白培养基
四、学生安排：
接种时每6人为一组，
五、操作步骤
.　　1.接种前4小时对接种室进行熏蒸，每个超净台取10ml左右甲醛液装入
瓶中，在超净台边加入5克左右高锰酸钾，立即放入超净台里；
接种前20-30分钟接通电源，打开紫外灯和风机。
2．洗净双手，穿好专用实验服进入接种室，用酒精棉球擦试双手，台面及
接种工具等。
3． 将酒精灯放在距超净台边缘约30cm，正对胸前处，注意以后的操作都要
在酒精灯的10cm半径范围内完成。点燃酒精灯，对剪子和镊子过火，先从头
至尾过火，然后对尖端反复过火；将种苗瓶放在灯前偏左处；将空白培养基
瓶放在灯前偏右处；将接种用培养皿放在距超净台边缘约15cm，正对胸前处，
以利操作的方便进行。
4．打开原种瓶，对瓶口先外壁，后内壁过火。然后准备接种：先将种苗移到
培养皿里。对香石竹等茎梢可切割茎段，剪时要茎节上部少留，节下部多留。
对草莓等没有茎、只有基生叶的种苗分离芽丛，最后均分离为1-2个芽，最好
为1个芽。
每瓶接4—5个茎段或小芽，若放4株呈正方形分布。若放5株最后一株要放在
正方形对角线交点处。接好后，瓶口和封口膜均要过火，扎口。每接完一瓶，
接种工具要放回酒精消毒瓶。
如果技能熟练的话，可用悬接法，用镊子夹住试管苗的顶端一节，拔出瓶口，
剪断这一节，将茎段插入空白培养基中。对芽丛可提起一个芽丛的一个芽，
用剪刀剪去其它部分，将单芽插入培养基里。
5接完一瓶原种后，可用酒精棉球擦拭双手，弃去含废弃物的培养皿，换用新
的无菌培养皿，以防交叉感染。
6接完10瓶种苗后，写好标签，移出超净台，置于塑料筐里，再接下一批。
7接种完毕，熄灭酒精灯，盖上酒精瓶，收拾净超净台面，先把种苗瓶移出，
然后将废物皿、空原种瓶、培养皿、接种工具等移出放到塑料筐里，带出接
种室，清洗干净。
8接后的培养物转移到培养室进行培养。3天后，经常检查污染情况，及时清
除培养瓶。