第四章 操作技术
目的要求：
1．一般掌握灭菌和消毒的区别　
2．掌握灭菌的不同方法和具体操作过程
　　3．掌握无菌接种的步骤 　
　　4．掌握外植体的培养方法和步骤
　　5．一般掌握外植体褐变和玻璃化的处理方法
　　6．掌握试管苗驯化的基本程序
　　7．一般掌握快速繁殖试管苗的计划安排及增殖倍数
计算方法

有了设计良好的实验室和基本设备以后,应当学习组织培养
的操作技术。包括灭菌、接种、培养、驯化等。

第一节 灭菌和接种
第二节 培养和驯化
第三节 试管苗增殖率的估算
第四节 快速繁殖的计划安排
本章小结
1．植物组织培养技术包括灭菌、接种、培养和驯化四个环节。
2．灭菌是指用物理或化学的方法杀死物体表面和孔隙内的微生物
及其孢子。消毒是指杀死、消除或抑制部分微生物的活动，使之
不能再发生危害作用，不如灭菌彻底。
3．常用的灭菌方法有两种：物理方法和化学方法。干热、湿热、
射线处理、过滤等属于前者；升汞、来苏水、高锰酸钾、酒精等
化学药剂处理则属于后者。
4．培养基一般采用湿热灭菌法；耐热的玻璃器皿和器械一般采用
干热灭菌法；镊子等接种用工具则采用灼烧灭菌法；不耐热的物质
如生长调节剂等一般采用过滤除菌法。
5．高压蒸汽灭菌前，要注意排净里面的冷空气；保压时间到达后，
要使指针回零才能开盖取物。
6．接种程序包括（1）植物材料表面的消毒，（2）切割外植体，
（3）将外植体移入培养基。
7．培养方法主要有固体培养法和液体培养法。前者是比较常用的
方法，简便易行。
8．接种后材料的培养步骤可分为：（1）初代培养，（2）继代培
养，（3）生根培养。
9．驯化时要注意培养基质的选择和温、光、水、肥、气的综合管理。
10．在快速繁殖计划安排上，要注意增殖倍数与现有的人力、物力
相协调，以提高生产效率。

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