第七章花药和花粉培养

8= 3457;药和花粉培养

目的要求：

1.掌握花Ő= 47;培养和花粉培养的区= 别

2.了解花Ő= 47;最佳接种时期

3.掌握花Ő= 47;培养的大致过程

4.掌握花ľ= 81;发育的四种途径

5.掌握花ľ= 81;培养的大致过程

花粉培养和花= 药培养异同点：花药培Ð= 59;属器官培养，花粉培= 养属细胞培养，但二= 2773;培养的目的一样，都是要诱导花౴= 1;细胞发育成单倍体细&= #32990;，最后发育成单倍= 307;植株。

培养特点及意= 义：花粉培Ð= 59;和花药培养都指在合= 成培养基上，改变其发育机೦= 1;，即不经过受精发生&= #30340;细胞分裂，由单个花粉粒ࡡ= 7;育成完整植物。由于&= #37117;能获得同花粉染色= 307;构成相同的单倍体植= ;株，经染色体加倍೎= 0;成为正常结实二倍体&= #26893;株。所以后者属于௩= 5;正的纯系。这和常规&= #22810;代自交纯化方法相= 604;，可节省大量的ਲ= 2;间和劳力。同时，花&= #33647;和花粉培养是研究= 943;数分裂，花粉生长机= ;制的生理、生化、遗&#= 20256;等基础理论的最好Ą= 41;法。

8.1 花药培养

花药培养改变花= ;粉的发育程序，使其分裂形成ಭ= 4;胞团，进而分化成胚&= #29366;体，产后再生植株A= 292;或形成愈伤组织，由= ;愈伤组织再分化成植&#= 26666;。

8.1.1 花药的材料选择= ;

一般选择单核= 399;　此时细胞核较大= 3621;中，称单核中央期Ӎ= 0;随着细胞体积迅速增&= #22823;，细胞核由中央位 = 622;推向一边，即单核靠= ;边期。以上均为单核&#= 26399;花粉。

单核期的确定= 　根据ń= 54;胞观察推测，双核期= 的花粉中开始积累淀= 1881;，不能使花粉发育ৎ= 4;植株。通常采用醋酸૧= 5;红或碘化钾染色，再&= #21387;片镜检，以确定花= 881;的发育时期。但是接= ;种前不可能把所有的&#= 33457;粉都进行一次发育ą= 02;期的镜检，通常是按照花൙= 4;长度大小与花粉发育&= #24180;龄的相关性，在实际操作中ࡢ= 2;一定大小的花蕾进行&= #30340;。如水稻选择剑叶= 494;枕抽出距下一叶，叶= ;枕约为4～6cm的孕&= #31319;稻。

8.1.2培养基的选择

花药培养所采用= ;的培养基是MS、N₆z= 89;B₅等。添加的&#= 28608;素有6-BA、KT和玉= ;米素， 2.4-D，NAA和IAA等。诱导愈伤 = 452;织的培养基可添加2.4-D，其浓度为1～3mg/l，分= ;化培养基可添加2～3mgBA，再加少许的IAA（0.2～0.5mg/l）= 5292;生根培养基可单独૿= 5;加生长素（0.5～ 1mg/l）= 290;

基本培养基中的= ;蔗糖浓度对花粉的诱&#= 23548;生长有一定作用。在辣椒花药培ࠥ= 9;中以6%的蔗糖浓度对ŉ= 86;状体的诱导率为最高= 。

8.1.3消毒接种培养

花药消毒，<= /b>从健壮Ą= 80;病植株采集花蕾，因= 为未开放的花蕾中的= 3457;药为花被包裹，本ไ= 3;处于无菌状态，可仅&= #29992;70%酒精棉球将花= 340;表面擦洗即可。也可= ;按对其它器官消毒处&#= 29702;方法进行，先用70%的酒精浸一下= 518;，在饱和漂白粉଒= 2;液中浸10～20min，৏= 0;用0.1%升汞液消毒7～10min，然后用无菌&#= 27700;洗3～5次。

消毒前Ɔ= 44;处理，将花ŕ= 74;剪下放入水中，在冰= 箱4～5℃下= 445;持3～4天。= 0302;温贮藏后，花药容ਵ= 1;发生胚状组织。接种&= #26102;把花蕾用解剖刀、镊子小心剥开ᦁ= 2;取出花药，注意去掉&= #33457;丝，然后散落接种= 040;培养基上，一个10ml的试管可接种20个花药。

培养条件：培养Ě= 01;度在23～28℃左&#= 21491;，每天11～16h的光照，光照= 378;度2000～4000lx。

培养历程：脱分= ;化培养时，可用MS+2.4ᦁ= 3;D的培养基，或N6+2.4－D的࣌= 1;养基，经10～30天，<= span lang=3DEN-US>可诱导生成愈ߪ= 0;组织，或少数生成胚&= #29366;体。愈伤组织增殖= 040;1～3mm左右&= #26102;，应转移到加有ಭ= 4;胞分裂素和微量生长&= #32032;的新的分化培养基= 978;，再经20～30天，&= #21487;获花粉植株。

8.1.4花药培养中的= 花粉发育过程

①营养细胞发育= 途径

在花药离体培养= ;中，花粉第一次有ߏ= 7;分裂形成不均等的营&= #20859;核和生殖核。生殖核较小，ߌ= 8;般不分裂或只分裂1～2次，= 3601;逐步退化。而体积࣪= 3;的营养核经多次分裂&= #19988;形成了细胞壁，最后变成了多ಭ= 4;胞团，迅速生长，很&= #24555;实破细胞壁，细胞= 981;断分裂，可以产生胚= ;状体或愈伤组织。

②生殖细胞发育= 途径

在这种途径下，= ;营养核只分裂1～2次就= 6864;化了，而生殖核经ࣩ= 0;次分裂发育成多细胞&= #22242;。

③营养细胞和生= 殖细胞同时发育的途= 4452;

花粉第一次有丝= ;分裂形成的营养核和&#= 29983;殖核同时进行多次Ñ= 98;裂，因此最后形成௚= 0;多细胞团包括两部分&= #65292;一部分细胞较࣪= 3;的是由营养细胞分裂&= #32780;来；另一部分细胞$= 739;小的是由生殖细胞分= ;裂而来。

④花粉均等分裂= 途径

花粉进行均等分= ;裂形成两个均等的子&#= 26680;，以后二核间产ஶ= 3;壁，形成两个子细胞&= #65292;由两个子细胞形成= 810;细胞团，迅速生长，穿అ= 2;药壁而形成胚状体或&= #24840;伤组织。

8.2花粉培养

花粉培养是指把= ;花粉从花药中分离出&#= 26469;，以单个花粉粒߯= 6;为外植体进行离体培&= #20859;的技术。由于花粉已是ࡕ= 3;倍体细胞，诱发它经&= #24840;伤组织或胚状体发 = 946;成的植株都是单倍体= ;植株。且不受花药的ത= 7;隔、药壁、花丝等体&= #32454;胞的干扰。但缺点= 159;较比花粉培养难度大= ;。

8.2.1花粉的Ñ= 98;离

取新鲜未开的花= ;蕾用自来水冲冼10min，以75%į= 40;酒精消毒10～15min，ਰ= 0;菌水冲冼2次，再用10%= 漂白粉上清液浸泡20min，无菌水冲冼3～4次。= 8982;后将花药放到加有࣌= 2;本培养基的小烧杯中&= #65292;用注射器的内管在= 903;杯的壁上挤压花药，= ;使花粉从花药ߑ= 3;释放出来。用尼龙筛&= #36807;滤掉药壁组滤液再 = 463;低速离心（100～160rpm）A= 292;上面的碎片可用吸管= ;吸掉，再加入新鲜培ࠥ= 9;基。连续进行两次过&= #28388;，到每毫升含10³～10⁴= 个花粉的浓度就可= 197;了。

简单的方法是花= ;粉从花药中挤出后，用镊子取出花౴= 1;空壳，放在培养基上&= #22521;养。此法适于微室= 685;培，但往往有药壁等= ;体细胞混入。

8.2.2花粉的预处理

①低温处理

在花粉第一次= 有丝分裂期进行低温= 2788;理。②重力的作用

在从花蕾中取= 出花药前1小时，在5℃条件下进行低温离= ;心机离心，可提高单倍体௚= 0;诱导率。

8.2.3培养基成分

在花粉培养中可= ;添加一些物质，有促进生长的߯= 6;用。培养基选用Nitsch作基本培养基，= 含有诸如硝酸ໜ= 1;、硫酸、柠檬酸铁、&= #37237;母浸出液和椰子胚= 083;等。

8.2.4花粉培养方法

①微室培养法

取含有50= 5374;80粒花粉的一滴á= 21;养液放在微室培养装= 置中，为了防止花粉అ= 2;裂，应在低倍条件（<= span lang=3DEN-US>4℃以下）接种，= ;然后在20℃下培养。

②看护培养法

在装有50ml&= #28082;体培养基的小培养= 399;中，用解剖针撕开഑= 7;药释放出花粉，形成&= #33457;粉悬浮液，最后稀%= 322;至0.5ml培养基中，含&#= 26377;10个花粉粒的细ŉ= 90;悬浮液。看护培养时，৚= 6;花药放在琼脂培养基&= #34920;面上，然后在每个!= 457;药上覆盖一小块圆片= ;滤纸。用移液管吸取1滴已准备好的഑= 7;粉粒悬浮液，滴在每&= #20010;小圆片滤纸上。培养在25&#= 8451;和一定光照强度下ᦁ= 2;大约一个月长出细胞&= #32676;。由于完整的花ത= 7;发育过程释放出有利&= #20110;花粉发育的物质，= 182;通过滤纸供给花粉，= ;促进了花粉的发育。

本章小结：

1.花药培Ð= 59;是器官培养，花粉培= 养属细胞培养，但二者培养目 &#= 30340;是一样，都是要诱导花粉细胞发= 2946;成单倍体细胞，最后发育成单倍体= 6893;株。

2.花药培Ð= 59;一般选择花粉的单核= 期进行接种，因为这= 9968;时期尚没有淀粉的ఱ= 5;累。

3.花药培Ð= 59;包括选择材料—消毒&= #8212;接种培养—愈合组ಭ= 5;生成—分化出单倍体&#= 26893;株。

4.花粉的Ö= 57;育途径包括营养细胞= 发育、生殖细胞发育= 2289;营养和生殖细胞同ਲ= 2;发育及花粉均等分裂&= #21457;育途径。

5.花粉培Ð= 59;包括花粉的分离— 預处理—培养过程

复习= 605;考题

1．花药培养和花粉培= 0859;有何区别？

2．花药培养时选择什= 0040;发育时期的花药？ߒ= 6;什么？

3．花药培养时培养基= 7197;制有什么特点？

4．花粉培养时怎样使= 9992;微室培养和看护培ࠥ= 9;。