MIME-Version: 1.0 Content-Type: multipart/related; boundary="----=_NextPart_01C7243D.55B4B660" 此文档为“单个文件网页”，也称为“Web 档案”文件。如果您看到此消息，但是您的浏览器或编辑器不支持“Web 档案”文件。请下载支持“Web 档案”的浏览器，如 Windows? Internet Explorer?。 ------=_NextPart_01C7243D.55B4B660 Content-Location: file:///C:/27D3EB5A/file9770.htm Content-Transfer-Encoding: quoted-printable Content-Type: text/html; charset="us-ascii" 第三章 培养基

第三章 培养基

目的要求：

　　1<= /b>．熟记几种培养基配Ą= 41;的特点和使用范围<= span lang=3DEN-US style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt'>

2．掌握基本培养基的ų= 97;方

3．掌握培养基的组成û= 04;分、各成分的功能和= 使用方式及注意事项

4．掌握培养基母= 液和常用培养基的配= 1046;方法和步骤，熟练৴= 4;握其培养基的灭菌方&= #27861;

5．一般掌握培养= 基的筛选办法

第一节     培养&#= 22522;的种类和成分

一、培养基的种类

    目前ࢲ= 9;际上流行的培养基有&= #20960;十种，常用的培养= 522;及特点如下：     = ; 

１．ＭＳ培养基  为= Ｍurashige和Ｓkoog&= #32553;写，二人于1962年为培养烟草= 2454;胞而设计的。

特点：是无机盐离= 3376;浓度较高，硝酸盐๙= 9;高，为较稳定的平衡&= #28342;液。

适用： 广泛地用于&#= 26893;物的器官、花药、ń= 54;胞和原生质体培养，= 效果良好。

２．Ｂ5á= 21;养基  是= 1968年由ＧamBorg等为培养大豆根细ೣ= 0;而设计的。

特点：含有较低的= 8133;，这可能对不少培ࠥ= 9;物的生长有抑制作用&= #12290;

适用：如双子叶植= 9289;特别是其中的木本ઁ= 3;物。        =             &nb= sp;            =             &nb= sp;          

３．Ｗhite培Ð= 59;基  是= 1943年由Ｗhite为培养番茄根尖而设= 计的。1963年又作了改良= 5292;称作Ｗhite改良培养基，= 5552;高了ＭgＳＯ4= 的浓度和增加ߚ= 2;硼素。

特点：无机盐数量= 6739;低，ＫＮＯ3　Ｍgʍ= 31;Ｏ4·７Ｈ= 2Ｏ　，ＣuＳＯ4= ·５Ｈ2Ｏ，　ＭnＳＯ4   <= /sub>&middo= t;Ｈ2Ｏ，　ＫＩ，= 　烟酸(Vpp)，　盐酸吡= ;哆醇(VB6)，　盐酸硫= ;胺素(VB1)。<= /span>

适用：生根培养。

    ４．ᦄ= 6;6培养基  是= 1974年朱至清等为水稻= 等禾谷类作物花药培= 0859;而设计的。特点：ৎ= 4;分较简单，ＫＮＯ3和（ＮＨ4）2ＳＯ4= 含量高。

适= ;用：广泛应用于小麦&#= 12289;水稻及其它植物的Ŏ= 57;药培养等。

５．ＫＭ－８Ｐ培= 0859;基  它= 是1974年为原生质体= 2521;养而设计的。

特点:有机成= 分较复杂，它包括了= 5152;有的单糖和维生素ᦁ= 2;

适用：原生质融合= 0340;培养。   

二、培养基的成= 分

    下面ߣ= 7;MS培养为例，其û= 04;分可以分为水、 无机盐、有机物、天= 8982;复合物、培养体的ਞ= 3;持材料等五大类。

  &nb= sp; &#= 65297;．水　

    作用ᦂ= 6;原生质体的组成成分&= #65292;代谢过程的介质和= 342;媒。它是生命活动过= ;程中。 配制：培养基母液时= 5201;用蒸馏水：配培养࣌= 2;时可用自来水。但在&= #23569;量研究上尽量用蒸'= 311;水。

２．无机元素

大量元素= 5292;指浓度大于0.5mmol/l的元素，有Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｃa<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>、Ｍg<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>、Ｓ等。其作用是ʍ= 06;

(1)N　

功能：是蛋白质、= 7238;、叶绿素、维生素ӌ= 9;核酸、磷脂、生物碱&= #31561;的组成成分， 是生命结构和功能物= 6136;不可缺少的。

供应形式：含有Ｎ= 5327;3－N又×= 47;ＮＨ4－N。ʍ= 26;Ｈ4－N对Č= 93;物生长较为有利。在= 制备培养基时以这两= 1181;形式供应。供应的୰= 9;质有ＫＮＯ3、、ＮＨ4ＮＯ3等。有时，也= 添加氨基酸。

(2)P　

功能：是磷脂的主= 5201;成分，而磷脂又是ಭ= 4;胞膜、细胞核的重要&= #32452;成部分。磷也是核%= 240;、ＡＴＰ、辅酶等的= ;组成成分。组织培养&#= 20013;，磷不仅增加养分z= 89;提供能量，而且也促= 进对Ｎ的吸收， 增加蛋白质在植物体= 0013;的积累。

供应形式：常用的= 9289;质有ＫＨ2ＰＯ4= 或ＮaＨ2Ｐ= Ｏ4等。

(3)K

功能：Ｋ对碳水化= 1512;物合成、转移、以ࡡ= 0;氮素代谢等有密切关&= #31995;，它具有活化酶的= 316;用。Ｋ增加时，蛋白= ;质合成增加， 维管束、纤维组织发= 6798;，对胚的分化有促๢= 7;作用。但浓度不易过&= #22823;，一般为１～３mg/l为好。

供应形式：制备培= 0859;基时，常以ＫＣl、ＫＮＯ3 等盐类提供。

(4) Ｍg、Ｓ和Ｃ= a

功能：　Ｍg= 是叶绿素的组成成分= 5292;又是激酶的活化剂ᦂ= 7;Ｓ是含硫氨基酸所构&= #25104;蛋白质的组成成分 = 290;Ｃa 是构成细胞壁į= 40;一种成分，Ｃa对细胞分裂、߼= 5;护质膜不受破坏有显&= #33879;作用，

供应形式：以ＭgＳＯ4= ·7Ｈ2Ｏ= 和ＣaＣl2·= ;２Ｈ2Ｏ提供。

(5)微量元素　

种类：指= 3567;于0.5mmol/l的元素， Ｆe<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>、Ｂ、Ｍn<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>、Ｃu<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>、Ｍo<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>、Ｃo<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>等。

功能：铁是一些氧= 1270;酶、细胞色素氧化຋= 8;、过氧化氢酶等的组&= #25104;成分。同时， 它又是叶绿素形成的= 4517;要条件。 培养基中的铁对胚的= 4418;成、芽的分化和幼ക= 5;转绿有促进作用。Ｂ&= #12289;Ｍn、Ｚn、= 5315;u、Ｍo、= 5315;o等，也是植物ಭ= 2;织培养中不可缺少的&= #20803;素，缺少这些物质= 250;导致生长，发育异常= ;现象。

供应形式：因其在pH５.２以&#= 19978;，易形成Ｆe（ＯＨ）3的不溶性沉淀，= 5925;用 Ｆe ＳＯ4·７Ｈ2Ｏ和 Ｎa2-ＥＤＴＡ结合成&#= 34735;合物使用。

当某些营养元素ߵ= 9;应不足时，愈伤组织&= #34920;现出一定的缺素症= 366;。如缺氮，会表现出= ;一种花色素苷的颜色&#= 65292;不能形成导管；缺ż= 81;，细胞停止分裂；缺= 硫，表现出非常明显= 0340;褪绿；缺锰或钼，࠵= 7;影响细胞的伸长。

３．有机化合物

(1)碳水化合物 

供应= 4418;式：最常用蔗糖，葡!= 796;糖和果糖也较好，麦= ;芽糖、半乳糖、甘露&#= 31958;和乳糖也有应用。

使用= 7987;度：２～ᦁ= 9;％，常用３％， 即配制A= 297;升培养基称取３０g蔗糖，有时可用２<= span lang=3DEN-US>.５％，但在胚࣌= 1;养时采用４～１５％&= #30340;高浓度， 因蔗糖对胚状体的发= 2946;起重要作用。

用量注意：不ࡧ= 6;糖类对生长的影响不&= #21516;。以葡萄糖效果最= 909;，果糖和蔗糖相当，= ;麦芽糖差一些；不同&#= 26893;物不同组织的糖类Ƃ= 56;要量也不同，

代用品：在࣪= 3;规模生产时，可用食&= #29992;的绵白糖代替。

   （2ᦀ= 9;维生素　

种类：主要&= #26377;VB1 （盐酸硫胺= 素）、VB6（盐酸吡哆&= #37255;）、VPP(烟酸)、VC(抗坏血酸) 、有时还使用ī= 83;物素、叶酸、VB2等。一般用&= #37327;为0.1～1.0mg/l。= 6377;时用量较高。

功能：以各&= #31181;辅酶的形式参与多= 181;代谢活动，促进生长= ;、分化作用。VB1对愈伤组织&= #30340;产生和生活力有重#= 201;作用，VB6能促进根的&= #29983;长，VPP与植物代谢&= #21644;胚的发育有一定关= 995;。VC有防止组织&#= 21464;褐的作用。

(3)肌醇　又叫环।= 9;六醇，

功能：参ߎ= 2;构建细胞壁。由磷酸&= #33889;萄糖转化而来，进= 968;步生成果胶物质。

肌醇与6分子磷酸残基相ಮ= 7;合形成植酸，植酸与&= #38041;、镁等阳离子结合&= #25104;植酸钙镁，植酸可= 进一步形成磷脂，参= 9982;细胞膜的构建。

能促进愈= 0260;组织的生长以及胚&#= 29366;体和芽的形成。促进ಭ= 2;织和细胞的繁殖、分&= #21270;。

使用浓度：一般为= 5297;００mg/l，

(4)氨基酸　　

功能：作为有机氮= 8304;，利于被细胞直接࡬= 0;收利用。

常用种类：甘氨酸= 5292;其它如精氨酸、谷ૐ= 8;酸、谷酰胺、天冬氨&= #37240;、天冬酰胺、丙氨%= 240;等。

特殊应用：用水解= 0083;蛋白或水解酪蛋白ᦁ= 2;是牛乳用酶法等加工&= #30340;水解产物，含有约= 108;十种氨基酸的混合物= ;，使用注意用量在10～1000mg/l之= 8388;。否则极易引起污੡= 9;。

（5<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>）天然复合物　大ä= 10;含氨基酸、激素、酶= 等一些复杂化合物。= 3427;对细胞和组织的增ૂ= 2;与分化有明显的促进&= #20316;用，但对器官的分= 270;作用不明显。

 ①椰乳  是椰乳的&#= 28082;体胚乳。它是使用ć= 68;多、效果最大的一种= 天然复合物。一般使= 9992;浓度在１０～２０ᦀ= 5;。

功能：它在愈伤ಭ= 2;织和细胞培养中有促&= #36827;作用。在马铃薯茎= 574;分生组织和草莓微茎= ;尖培养中起明显的促&#= 36827;作用，但茎尖组织į= 40;大小若超过１mm时，椰= ;乳就不发生作用。

    其它②香蕉③马铃薯= ;④水解酪蛋白⑤酵母= 552;取液（ＹＥ）（０= .<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>０１～０.<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>０５％），

4.植物ବ= 8;素　是培养基的关键&= #29289;质，对植物组织培= 859;起着决定性作用。

（1ᦀ= 9;生长素类　

功能：1诱导愈伤组织形成&= #65292;2诱导根的分化ӌ= 8;3促进细胞分裂ӌ= 9;伸长生长。在促进生&= #38271;方面，根对生长素= 368;敏感。 在极低的浓度下，（= 5297;０－５～１０ᦁ= 3;８mg/L）就可促进生= 8271;,其次是茎和芽Ӎ= 0;

性质：天然的生长= 2032;热稳定性差，高温= 9640;压或受光条件易被అ= 2;坏。在体内易受酶Š= 99;。故常用人工生长素= 类物质。

配制方法：用少量95= ％酒精助溶。2<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>，4<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>－D<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>可用0.1mol/l<= /span>的NaOH或KOH助溶。配后贮于冰ļ= 65;中。   

IAA（indo acetic acid吲哚乙酸）

来源：天然存在的= 9983;长素，亦可人工合ৎ= 4;，

性质：是活力最弱= 0340;激素，对器官形成௚= 0;副作用小，高温高压&= #26131;被破坏，也易被胞= 013;的IAA分解酶和光照&= 477;解。

NAA（naphthalene acetic acid萘乙酸）<= /o:p>

来源：来自&= #22823;批量人工合成，

性质：在组&= #32455;培养中的起动能力#= 201;比IAA高出3～<= span lang=3DEN-US>4倍， 耐高温高Õ= 87;，不易被分解破坏，= 所以应用较普遍。

作用：NAA和IBA广= 泛用于生根，并与细= 2990;分裂素互作促进芽௚= 0;增殖和生长。

IBA（indolebut= yric acid吲哚丁酸）

来源：人工合成

作用：促进发根೦= 1;力最强。

2，4<= /b>－D<= /b>（2<= /b>，4<= /b>－二氯苯氧乙酸）

起动能力比ＩＡᦃ= 3;高１０倍，

功能：特别在促๢= 7;愈伤组织的形成上活&= #21147;最高，但它强烈抑= 046;芽的形成，影响器官= ;的发育。= 6866;宜的用量范围较狭ీ= 4;，过量常有毒效应。<= span lang=3DEN-US>

（2）GA（gibberellic acid赤霉素）　= ;有20多种，培养基È= 13;常添加是GA3生理活性及&= #20316;用的种类、部位、= 928;应等各有不同、，

作用：1促进= 幼苗茎的伸长生长，2赤霉素还用于৕= 1;破休眠，促进种子、&= #22359;茎、鳞茎等提前萌= 457;。3添加赤霉素可߹= 9;进器官或胚状体的生&= #38271;。

配制：可用少量95％酒精助溶。ũ= 96;霉素不耐热，高压灭= 菌后将有70～100％失= 效，应当采用过滤灭= 3740;法加入。

（3ᦀ= 9;细胞分裂素类　

性质和种类&= #65306;是腺࢚= 8;呤的衍生物，包括6-BA（6－苄= 基氨基嘌呤）、Kt（kinetin激= 160;素）、Zt（zeatin玉ľ= 59;素）等。

其中ZT活性最= ;强，但非常昂贵，常&#= 29992;的是6-BA。　　

　作用：①诱= 548;芽的分化促进侧芽萌= ;发生长，②促进细胞= 0998;裂与扩大。③抑制根= ;的分化。因此，多用&#= 20110;诱导不定芽的分化z= 89;茎、苗的增殖，避免= 在生根应用。

    生长ಃ= 2;与细胞分裂素的比例&= #20915;定着发育的方向，

生长调节物质的߳= 1;用甚微，一般生长素&= #27987;度的使用为0.05～5mg/l， 细胞分裂素0.05～10mg/L。

    ５．培养材料的支ý= 45;物

(1)   琼脂

功能：只是固化剂= 2290;本身并不提供任何ശ= 9;养。

性质：琼脂能溶解= 2312;热水90℃以上中，成为溶胶= 5292;冷却至40℃即凝固为固体状凝= 3014;。

用量：在6～= 10g/l之间，若浓度&#= 22826;高，培养基就会变ô= 71;很硬，营养物质难以= 扩散到培养的组织中= 1435;。若浓度过低，凝ࢲ= 6;性不好，

质量：一般琼脂以= 9068;色浅、透明度好、૦= 5;净的为上品。

凝固能力：除与原= 6009;、厂家的加工方式੍= 7;关外，还与高压灭菌&= #26102;的温度、时间、pH值等因素有关ʌ= 92;长时间的高温会使凝= 固能力下降，过酸过= 0897;加之高温会使琼脂ࡡ= 7;生水解，丧失凝固能&= #21147;。时间过久，琼脂= 464;褐，也会逐渐丧失凝= ;固能力。

固体培养基优缺点= 5306;操作简便，通气问ག= 4;易于解决，便于观察&= #30740;究等，但培养物与= 521;养基的接触面小，各= ;种养分扩散较慢，

   （2)其它  有玻璃纤&#= 32500;、滤纸桥、海绵等ʌ= 92;总的要求是排出的有= 害物质对培养材料没= 6377;影响或影响较小。

    ６．抗生物质antibioti= c

 　　　种&#= 31867;：抗生物质有青霉ŀ= 32;、链霉素、庆大霉素= 等，= 9992;量在5～20mg/l之໾= 8;。

= 作用：= 8450;止菌类污染，

　　7. = 5239;氧化物

种类半胱氨酸及Vc，常用50&= #65374;200mg/l的浓度，其它= 抗氧化剂有二硫苏糖= 7255;、谷胱甘肽、硫乙ຍ= 5;、及二乙基二硫氨基&= #30002;酸酯等。

原理：植物组织在= 0999;割时会溢泌一些酚౲= 7;物质，接触空气中的&= #27687;气后，自动氧化或= 001;酶类催化氧化为相应= ;的醌类，产生可见的&#= 33590;色、褐色以致黑色ʌ= 92;这就是酚污染。这些= 物质渗出细胞外就造= 5104;自身中毒，使培养௚= 0;材料生长停顿，失去&= #20998;化能力，最终变褐= 515;亡。木本植物较严重= ;，

= 8. 活性炭active carbon=

性质：活&#= 24615;炭为木炭粉碎经加ð= 37;形成的粉沫结构，它= 结构疏松，孔隙大，= 1560;水力强，有很强的࡬= 0;附作用

使用浓度&#= 65306;通常使用浓度为0.5-10g/l。

作用：1<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>吸附非极性物质和ō= 94;素等大分子物质，包= 括琼脂中所含的杂质= 5292;培养物分泌的酚、ຎ= 0;类物质以及蔗糖在高&= #21387;消毒时产生的5<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>－羟甲基糖醛及激ŀ= 32;等。

       茎尖初代&#= 22521;养，新梢增殖阶段ʌ= 92;活性炭有效，

2 促进生根

其机理一&#= 33324;认为与活性炭减弱Ð= 09;照有关，可能是由于= 根顶端产生促进根生= 8271;的IAA，但IAA易受可见光的光氧Ô= 70;而破坏，

副作用：&#= 30740;究表示，每毫克的ė= 63;性炭能吸附100毫微克左右的生长Ŧ= 43;节物质

 

 

 

 

 

 

第= 0108;节  培养&#= 22522;的制备

一、母液 stock solution= 的配制和保存

    在组= 2455;培养工作中，配制࣌= 1;养基是日常工作。为&= #31616;便起见，通常先配= 046;一系列母液，即贮备= ;液。 所谓ē= 97;液是欲配制液的浓缩= 液，这可保证各物质= 5104;分的准确性及配制ਲ= 2;的快速移取，并便于&= #20302;温保藏。一般配成= 604;所需浓度高10～100倍的= 母液。母液配制时可= 0998;别配成大量元素、঑= 4;量元素、铁盐、有机&= #29289;和激素类等。配制= 102;注意一些离子之间易= ;发生沉淀，如Ｃa2＋和ＳＯ= ;42－&#= 65292;Ｃa2＋、Ｍg2＋和ＰＯ= ;43-一&= #36215;溶解后，会产生沉= 096;，一定要充分溶解再= ;放入母液中。配制母&#= 28082;时要用蒸馏水或重œ= 76;馏水。药品应选取等= 级较高的化学纯或分= 6512;纯。药品的称量及ऩ= 0;容都要准确。各种药&= #21697;先以少量水让其充= 998;溶解，然后依次混合= ;。一般配成大量元素&#= 12289;微量元素、铁盐、Ņ= 00;生素等母液， 其中维生素、氨基酸= 1867;可以分别配制，也ࡤ= 7;以混在一起。母液配&= #22909;后放入冰箱内低温= 445;存，用时再按比例稀= ;释。

    下面以ＭＳ培养基Ò= 46;备为例，概述其制备= 方法（表3<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>－2<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>）。

1．大量元素母液可ų= 97;成10= 倍液。用分析天平ý= 53;表3<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>－2<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>称取药品，分别加100ml左右蒸馏水溶解后ʌ= 92;再用磁力搅拌器搅拌= ，促进溶解。注意Ca2+= 和PO4<= /sub>3-易发生沉淀。然后Ì= 98;入1000ml 定容瓶中，再加水ê= 50;容至刻度，即成为１= ０倍母液。

2．微量元素母液  可配成100倍液。用分析天平ý= 53;表准确称取药品后，= 分别溶解，混合后加= 7700;定容至1000ml。

3．铁盐母液 可配成100倍液，按表称取药Ø= 97;，可加热溶解， 混合后加水定容至1000ml 。

4．有机物母液  可配成500倍母液。按表分别ĸ= 16;取药品，溶解，混合= 后加水定容至500ml 。

 　 5．激素母液的配制

    每种激素必须单独ų= 97;成母液，浓度一般配= 成1mg/ml。用时根据需要取ī= 92;。因为激素用量较少= ，一次可配成５０ml 或１００ml= 。另外，多数激素Ɓ= 90;溶于水，要先溶于可= 溶物质，然后才能加= 7700;定容。它们的配法ࣳ= 4;下：

  &nb= sp; I AA、IBA、GA先溶于少量的９= ５％的酒精中．再加= 7700;定容到一定浓度．

    NAA可溶于热水或少量ʍ= 05;５％的酒精中，再加= 水定容到一定浓度．

    2,4-D可用少量NaOH溶解后，再加水定ê= 81;到浓度。

    Kt和BA= 先溶于少量1mol的HCl中再加水定容．

    玉米素先溶于少量ʍ= 05;５％的酒精中，再加= 热水到一定浓度．

配制好的母液瓶ߍ= 8;应分别贴上标签，注&= #26126;母液名称、配制倍= 968;、日期及配一升培&#= 20859;基时应取的量。

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

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&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

&nbs= p;

        =   　　　 表3－2   ＭＳ培养基母液的ų= 97;制

化 合 物

名    称

 

原配方量

mg

扩大

 倍数

称取量

mg

母液

体积

(ml)

配制1ࡓ= 9;培养基应移取= ;量

(ml)

母液名称

 

ＮＨ4ＮＯ3

1650

10=

16500

 

 

 

 

1000

 

 

 

 

100

大量元素

母

液

ＫＮＯ3        = ; 

1900

10=

19000

CaCl·2H2= O

440

10

4400

MgSO4 &mi= ddot;7H2O

370

10=

3700

KH2PO4

170

10

1700

MnSO4&mid= dot;H2O

22.3

100

2230

 

 

 

 

1000

 

 

 

 

10=

&n= bsp;

&n= bsp;

微量元素

母

液

&n= bsp;

&n= bsp;

ZnSO4&mid= dot;7H2O

8.6

100

860

CoCl·6H2= O

0.025

100

2.5

CuSO4&mid= dot;5H2O

0.02

100

25=

H3BO= 3

6.2

100

620

Na2MO4·2H2O

0.25

100

25=

KI=

0.83

100

83=

FeSO4&mid= dot;7H2O

28.7

100

2870

 

1000

 

10=

铁盐母液

Na2-EDTA<= o:p>

37.3

100

 

3730

 

烟酸(Vpp)

0.5

50=

25=

 

500

 

10=

&n= bsp;

有机物

母液

&n= bsp;

&n= bsp;

盐酸吡哆醇

0.5

50=

25=

盐酸硫胺素

0.1

50=

5<= /p>

肌醇

100

50=

5000

甘氨酸

2<= /p>

50=

100

&nbs= p;

二、培养基的配制

按表用量筒移取࣪= 3;量元素母液100ml，用专一对应的移Ę= 82;管分别吸取微量元素= 母液10ml、铁盐母液10ml、有机物母液10ml，均置入１０００ml= 定容瓶中,<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>若不加任何激素，Ò= 17;为ＭＳ０培养基ʍ= 07;若需加激素按配方移= 取激素母液即可

将已装母液的定ब= 1;瓶用蒸馏水或自来水&= #23450;容到１０００ml= ，取１／３左右倒Ð= 37;小铝锅中加热。同时= ，称好３０克&#= 34071;糖，称琼脂丝７克（&#= 25110;琼脂粉），也倾入ë= 67;铝锅中，边加热边搅= 拌，防止糊底。旺火= 9038;开，再用文火加热ᦁ= 2;直至琼脂全部融化即&= #28165;澈见底为度。（若= 992;琼脂粉，应加入100ml左右的液体培养基ʌ= 92;并搅拌均匀）。然后= 再倾入定容瓶余下的= 8082;体培养基，摇晃均ࡌ= 8;即可。

培养基配好后，ව= 1;调整pH= 值。用0.1M的NaOH或HCl液调成5.8左右。在培养基配Ą= 41;不大变动的情况下可= 用经验法。即将连续= 9977;次测定所加入的酸৏= 0;碱液的平均值作为以&= #21518;调整的用量值。调= 518;注意一定要摇动均匀= ;，还要注意酸或碱液&#= 19981;要放置时间太久。

四、培养基的分= 装与灭菌

培养基合成后要ฦ= 5;热分装，100ml的容器约装入30-40ml培养基，即1升培养基约&#= 35013;35= 瓶左右。太多则浪ũ= 53;培养基，太少不易接= 种和影响生长。但要= 6681;据培养对象来决定Ӎ= 0;如果培养时间较长时&= #65292;应适当多装培养基A= 307;生根等短期培养时，= ;可适当少加培养基。&#= 20998;装时不要把培养基ó= 24;到管壁上，以免日后= 污染。装后用封口材= 6009;包上瓶口，扎口后ᦁ= 2;写上培养基种类，准&= #22791;灭菌。注意不能放 = 622;时间过长，以免产生= ;污染。

培养基用高压灭മ= 0;。打开锅盖，加水至&= #27700;位线。把已装好培= 859;基的三角瓶，连同蒸= ;馏水及接种用具等放&#= 20837;锅筒内，装时不要Ű= 07;分倾斜培养基，以免= 弄到瓶口上或流出。= 8982;后盖上锅盖，对角ਭ= 9;紧螺丝，接通电源加&= #28909;，当升至0.05MPa时，打开放气阀放Ĕ= 68;，回“0<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>”后关闭放气阀。ঈ= 3;气压上升到0.10MPa时，保压灭菌20= 分钟，到时停止加ġ= 09;。当气压回“0<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>”后打开锅盖，取࠲= 6;培养基，放于平台上&= #20919;凝。灭好的培养基= 981;要放置时间太长，最= ;多不能超过1<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>周。

第三节    培养= ;基的选择

在建立一个新的实= 9564;体系时，为了能研࠸= 6;出一种适合的培养基&= #65292;最好先由一种已被= 191;泛使用的基本培养基= ;（如MS培养基或B<= sub>5培养基）开始。&= #24403;通过一系列的实验A= 292;对这种培养基做了某= ;些定性和定量的小变&#= 21160;之后，即有可能得Ò= 40;一种能满足实验需要= 的新培养基，选择最= 0339;培养基。常用试验ਬ= 1;法主要有单因子试验&= #12289;多因子试验及广谱= 454;验等。

一、单因子试验

单因子试验中，培= 0859;基中其它成分都维০= 5;在一般水平上，只变&= #21160;一个因子，以找出$= 825;一因子对试验的影响= ;和影响的程度，例如MS基本培养基的Ð= 54;它成分和用量都不变= ，只变动NAA用量对某一培= 859;物生根的影响，这种= ;只研究一个因素的试&#= 39564;就是单因子试验。

生物学试验不同于= 9289;理学或化学试验，ੌ= 8;显著的差别是在生物&= #23398;试验中必需设置对= 031;组与试验组，试验组= ;可以有一组或几组，&#= 38543;试验的复杂性增加ʌ= 92;对照组也可能有一组= 以上。要求对照组与= 5797;验组中的试验个体ᦁ= 2;即植物组织块或其它&= #22521;养物，必须在遗传= 615;、生理状态、前培养= ;条件等方面，尽可能&#= 23436;全一致。以保证试Ƌ= 64;结果是来源于试验因= 子，而不是由于试验= 6448;料不一致导致的。

试验中各处理一般= 7117;要设有一定的重复ᦁ= 2;以取得可靠的试验结&= #26524;。随试验规模和要= 714;不同，大多每个项目= ;要有4～10瓶，&#= 27599;瓶至少3块培养物或3丛小幼苗。

二、多因子试验

对培养基中两个或= 0004;个以上因素进行研ి= 0;的试验称为多因子实&= #39564;，试验可采用完全#= 797;验方案，也可选用正= ;交设计方案，完全试&#= 39564;方案具有均衡完全į= 40;特点，各个因子的每= 个水平都相互搭配，= 6500;成了所有可能的处ச= 2;组合，如研究NAA和6-BA的ੌ= 8;佳浓度组合，每个因&= #23376;各设5个浓度水平（0、0.5、2.5、5、10μmol/l），这两种因ड= 6;各种浓度的所有组合&= #65292;就构成了一个具有25项处理的试验ʌ= 88;表3－3）。

完全试验方案试验= 2240;子越多，处理数越ࣩ= 0;，试验越复杂，消耗&= #30340;精力、物力越多。= 026;了减少试验处理，但= ;又能准确全面地获得&#= 35797;验信息，通常采用Ē= 91;交试验。例如，采用= 正交设计，在使用此= 4920;时就可以安排4个因子，3种水平的试验，一ࠤ= 9;做9种不同搭配的෻= 7;验，其结果相当于做&= #20102;27次种种搭配的ť= 97;验。正交试验虽然是= 多因素搭配在一起的= 5797;验，但是在试验结ੜ= 4;的分析中，每一种因&= #32032;所起的作用却又能= 815;明白无误地表现出来= ;。因此一次系统的试&#= 39564;结果，就可以把问Ɔ= 64;分析得清清楚楚，用= 有限的时间取得成倍= 0340;收获。在组织培养ం= 0;究中，可用于同时探&= #27714;培养基中适宜的几= 181;成分的用量，如细胞= ;分裂素、生长素、糖&#= 21644;其它成分的用量。

表3－3    2<= /span>种激素5种浓度的实验ಭ= 2;合

 

 

6-BA&= #65288;µmol/l）

0

 

0.5

 

2.5

 

5

 

10

NAA

（µmol/l= ）

0

1

2

3

4

5

0.5

6

7

8

9

10

2.5

11

12

13

14

15

5

16

17

18

19

20

10

21

22

23

24

25

 

三、逐步添加和逐= 7493;排除的试验方法

在植物组织分化与= 0877;生的研究中，在没੍= 7;取得可靠的分化与再&= #29983;之前，往往添加各= 181;有机营养成分，而在= ;取得了稳定的再生之&#= 21518;，就可以逐步减少Ű= 25;些成分。在逐步添加= 时是使试验成功，在= 6880;步减少时是缩小范ࢲ= 0;，以便找到最有影响&= #21147;的因子，或是为了= 454;用上的需要竭力使培= ;养基简化，以降低成&#= 26412;和利于推广。在寻ĕ= 14;最佳激素配比时，也= 经常用到这种加加减= 0943;的简单方法。

四、广谱实验法

在广谱实验法中，= 5226;培养基中所有组分࠳= 8;为4大类：无机盐ӌ= 9;有机营养物质（蔗糖&= #12289;氨基酸和肌醇等） = 289;生长素、细胞分裂素= ;。对每一类物质选定&#= 20302;（L）、中（M）、和高（H）3个浓= 4230;。4类物质各3种浓度的自由组合ࡘ= 3;构成了一项包括81个处理的实验z= 90;在这81个处理中最好į= 40;一个可用4个字母表示。ߴ= 3;如，一个包含中等浓&= #24230;无机盐，低浓度生&= 271;素、中等浓度细胞分= ;裂素和高浓度有机营&#= 20859;物质的处理即可表Ķ= 34;为MLMH。达到这个阶= 7573;，再试用不同类型௚= 0;生长素和细胞分裂素&= #21363;可找到培养基的最= 339;配方。这是因为不同= ;类型的生长素和细胞&#= 20998;裂素对不同植物的ė= 63;性有所不同。

 

本章ऴ= 7;结

1= 5294;= 4120;用的培养基有：1）MS培养&#= 22522;，其特点是无机盐Ø= 44;离子浓度较高；2）B5培= ;养基，其特点是含有&#= 36739;低的铵；3）White培养= ;基，其特点是无机盐&#= 20302;，适于生根；4）N6培= ;养基，其特点是KNO3和（NH4）2SO4含= 量较高，适于花药培= 0859;；5）KM－8P培养基，其特点&= #26159;有机成分较多，适= 110;原生质体培养。

2．水、无机盐、有机Ĥ= 89;质、天然复合物、凝= 固剂是构成培养基的= 0116;种主要成分。

3．配制培养基时，为Ì= 15;于保存，提高效率，= 通常先配制母液。即= 0808;配成大量元素10= 倍液 ；微量元素100倍液 ；铁盐100倍液；有机物500倍液；激素1mg= 725;l<= span style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt;font-family:SimSun; mso-ascii-font-family:"Times New Roman";mso-hansi-font-family:"Times New Ro= man"'>倍液。

4．培养基常分装到100ml的三角瓶，含量一ō= 24;为每瓶30= ～40ml；高压灭菌时，压Ó= 47;通常为0.1MPa以上，持续20min。

5．筛选合适的培养基Ç= 68;般有四种方法，即单= 因子试验法、多因子= 5797;验法、逐步添加和৵= 0;除法以及广谱实验法&= #12290;其中，第一种方法= 604;较简单，第二种方法= ;比较准确，而后两种&#= 26041;法则比较复杂。

复习思考题

&nbs= p;

1<= /b>．目前，常用的培养á= 22;种类有哪些？各有什= 么特点？

2<= /b>．培养基包括哪些成Ñ= 98;？各有什么作用？<= span lang=3DEN-US style=3D'font-size:12.0pt;mso-bidi-font-size:10.0pt'>

3<= /b>．简要说明MS= 培养基的基本组成ʍ= 11;

4<= /b>．配制培养基时，为É= 60;么要先配母液？如何= 配制母液？

5<= /b>．怎样利用母液配制á= 21;养基？

6<= /b>．培养基内加入活性Ġ= 45;的目的是什么？应注= 意什么问题？

7<= /b>．配制培养基时，为É= 60;么要加入一定量的植= 物生长物质？

8<= /b>．怎样进行培养基的ƌ= 40;压湿热灭菌？

9<= /b>．试比较选择培养基ą= 02;，几种方法的优劣？=

表 3-1 MS和White培养基= 7197;方表

物质名称

ʍ= 25;Ｓ(Mg/l)

Ｗhite(Mg/l)

ＮＨ4ＮＯ3

1650

 

ＫＮＯ3

1900

80=

ＣaＣl2·２Ｈ2Ｏ

440

 

ＭgＳ= 5327;4·７Ｈ2Ｏ

370

720

ＫH2ＰＯ4

170

 

ＦeＳ= 5327;4·７Ｈ2Ｏ

28.7

 

Ｎa2-ＥＤＴＡ

37.3

 

ＭnＳ= 5327;4   ·Ｈ2Ｏ<= /span>

22.3

7<= /p>

ＺnＳ= 5327;４·７Ｈ2Ｏ<= /span>

8.6

 

ＣoＣl2·６Ｈ2Ｏ

0.025

 

ＣuＳ= 5327;4·５Ｈ2Ｏ

0.025

0.03

Ｎa2ＭoＯ4&middo= t;２Ｈ2Ｏ<= /span>

0.25

 

H3BO= 3

6.2

 

ＫＩ=

0.83

0.75

烟酸(Vpp)

0.5

0.5

盐酸吡哆醇(VB6)

0.5

0.1

盐酸硫胺素(VB1)

0.1

0.1

肌醇

100

 

甘氨酸

2<= /p>

3<= /p>

&nbs= p;

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